噬菌體篩選展示技術(shù)經(jīng)近20年的發(fā)展和完善，已被廣泛應(yīng)用于抗原抗體庫(kù)的建立、藥物設(shè)計(jì)、疫苗研究、病原檢測(cè)、基因治療、抗原表位研究及細(xì)胞信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)研究等。噬菌體展示系統(tǒng)模擬了自然免疫系統(tǒng)，使我們有可能模擬體內(nèi)抗體生成過程，構(gòu)建高親和力抗體庫(kù)。由于噬菌體展示技術(shù)實(shí)現(xiàn)了基因型和表型的有效轉(zhuǎn)換，使研究者在基因分子克隆基礎(chǔ)上實(shí)現(xiàn)了蛋白質(zhì)構(gòu)象體外控制，從而為獲取具有良好生物學(xué)活性的表達(dá)產(chǎn)物提供了強(qiáng)有力手段。另外，噬菌體展示技術(shù)已成為不經(jīng)過免疫獲取特異性人源抗體的新途徑，為獲取對(duì)人類和動(dòng)物疾病有診斷和治療價(jià)值的單克隆抗體提供了重要手段。
噬菌體展示技術(shù)是將多肽或蛋白質(zhì)的編碼基因插入噬菌體外殼蛋白結(jié)構(gòu)基因的適當(dāng)位置，在閱讀框正確且不影響其他外殼蛋白正常功能的情況下，使外源多肽或蛋白與外殼蛋白融合表達(dá)，融合蛋白隨子代噬菌體的重新組裝而展示在噬菌體表面。展示到噬菌體表面的多肽或蛋白保持相對(duì)獨(dú)立的空間結(jié)構(gòu)和生物活性，可以與靶分子結(jié)合和識(shí)別。噬菌體展示的肽庫(kù)或蛋白庫(kù)與固相抗原結(jié)合，洗去未結(jié)合的噬菌體，然后用酸堿或者競(jìng)爭(zhēng)的分子洗脫下結(jié)合的噬菌體，中和后的噬菌體感染大腸桿菌擴(kuò)增，經(jīng)過3-5輪的富集，逐步提高可以特異性識(shí)別靶分子的噬菌體比例，終獲得識(shí)別靶分子的多肽或者蛋白。
用抗體作為噬菌體篩選的蛋白，從噬菌體展示的隨機(jī)多肽庫(kù)中，篩選出可以與抗體特異性結(jié)合的噬菌體，經(jīng)測(cè)序分析，獲得該抗體識(shí)別的抗原表位。該技術(shù)為抗原抗體反應(yīng)機(jī)制研究，診斷試劑開發(fā)，疫苗制備等提供依據(jù)。
目前的表位鑒定技術(shù)能夠?qū)崿F(xiàn)：
1.單抗藥物及診斷用單抗的制備；
2.研制包括“通用”目標(biāo)在內(nèi)的治療性和預(yù)防性重組多價(jià)肽疫苗；
3.研制單表位或重組多表位肽檢測(cè)抗原；
4.篩選基于表位基序的疾病、腫瘤等新的特異診斷標(biāo)志物；
5.高通量發(fā)現(xiàn)同源蛋白中全部保守性和特異性表位；
6.篩選功能性抗體表位或者抗體中和性及可及性表位；
7.為表位水平分析病毒遺傳進(jìn)化和變異，提供抗原漂移和轉(zhuǎn)移的直接證據(jù)。
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更新時(shí)間：2020-07-07
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