單克隆抗體制備與多克隆抗體主要的區(qū)別是MAb為單一種B細胞克隆所產(chǎn)生的一種均一的免疫球蛋白分子。所以MAb是B細胞克隆的標(biāo)志，是一種*型的抗體，它的特異性是針對一個抗原決定簇的。制備單克隆抗體不能用化學(xué)分離的方法從多克隆抗體中去分離純化得到它，而是用分離產(chǎn)生抗體的B細胞克隆的方法得到它。

 

　　單克隆抗體制備原理：常用的單克隆抗體是小鼠的單抗，此外也有大鼠的和人源的單抗。人源單抗制備比較復(fù)雜。小鼠單抗的制備通常是使用Balb/c小鼠的B細胞和它的骨髓瘤細胞。大鼠的單抗制備通常用Lou/c大鼠及其骨髓瘤和Y3/AO大鼠及其骨髓瘤細胞。B細胞是從免疫動物的脾臟中分離出來的。動物免疫方法與抗血清制備相同，只是在制備脾臟前3d必須進行一次靜脈加強注射以保證得到的B細胞有旺盛的分泌抗體的活性。骨髓瘤細胞有許多細胞株是經(jīng)過誘變和篩選得到的缺陷型。

 

　　篩選的標(biāo)準(zhǔn)是①瘤細胞本身不產(chǎn)生抗體或者產(chǎn)生抗體的某種鏈，但不能分泌；②是次鳥嘌呤核苷酸轉(zhuǎn)移酶（HGPRT）和胸腺嘧啶激酶（TK）的缺陷型。因為這種缺陷型的瘤細胞正常的核酸合成途徑被氨基喋吟（aminopterin）阻斷后，由于缺失這些酶，即使補充它的底物次（H）和胸腺嘧啶（T），核酸合成的旁路也不能起到救援的作用，結(jié)果導(dǎo)致瘤細胞死亡。而雜交瘤細胞因帶有B細胞的全套基因，在HAT存在的條件下借助于HGPRT和TK的作用通過替代的核酸合成途徑能正常合成DNA和RNA。所以雜交瘤能正常地生長繁殖而被選擇出來。未被融合的游離的B細胞只能存活3d而后自行死亡。這就是用HAT培養(yǎng)基進行選擇的原理。