技術(shù)文章
TECHNICAL ARTICLES蛋白純化是利用不同蛋白間內(nèi)在的相似性與差異,利用各種蛋白間的相似性來除去非蛋白物質(zhì)的污染,而利用各蛋白質(zhì)的差異將目的蛋白從其他蛋白中純化出來。每種蛋白間的大小、形狀、電荷、疏水性、溶解度和生物學活性都會有差異,利用這些差異可將蛋白從混合物如大腸桿菌裂解物中提取出來得到重組蛋白。艾柏森生物可以提供大規(guī)模蛋白純化、融合標簽蛋白純化、無標簽蛋白純化等多種蛋白純化技術(shù)服務(wù)。艾柏森生物蛋白純化服務(wù)包括:1.抗體純化(ProteinA/G)2.工業(yè)級別大規(guī)模純化服務(wù)3.膜蛋白純化服務(wù)4....
大腸桿菌表達系統(tǒng)是目前應(yīng)用*泛地蛋白表達系統(tǒng)。它具有:遺傳背景清楚;易于培養(yǎng)和控制;轉(zhuǎn)化操作簡單;表達水平高;成本低;周期短等特點。同時是常用也是經(jīng)濟實惠的蛋白表達系統(tǒng),在基因表達技術(shù)中發(fā)展最早。主要可能有兩種原因,一種是大腸在加入IPTG等誘導(dǎo)劑后大腸停止生長或者裂解,這時候我們要考慮蛋白本身對該菌是有一定毒性的,這時候我們可以選擇一些采用嚴緊控制的宿主菌株,比如帶有pLysS的菌株。另外一種原因就是很令人頭疼的了,當我們發(fā)現(xiàn)出現(xiàn)大面積搖瓶中細菌量逐漸降低甚至培養(yǎng)基回復(fù)到澄...
關(guān)于包涵體的復(fù)性一直是生物制藥的瓶頸,包涵體的處理一般包括這么幾步:菌體的破碎、包涵體的洗滌、溶解、復(fù)性以及純化。一、包涵體蛋白的表達在平板上挑取單菌落,接種于含有氨芐青霉素和卡那霉素抗性的5mlLB培養(yǎng)基中,37℃過夜培養(yǎng),然后轉(zhuǎn)接到100mlLB培養(yǎng)基中,37℃培養(yǎng)至A600為0.4~0.6時,加入IPTG至終濃度為0.5mmol/L誘導(dǎo)3.5h。8000r/min離心5min收集菌體,加入10ml50mmol/LTris-HCl,冰浴下超聲波破碎后12000r/min離...
多克隆抗體制備能識別出與免疫原蛋白具有高同源性的蛋白,或者從非免疫原物種的組織樣品中篩選靶蛋白,例如當未測試物種中的抗原性質(zhì)未知時,有時會使用多克隆抗體??勺R別多個結(jié)構(gòu)域,即使原始抗原的一些空間結(jié)構(gòu)或者序列發(fā)生小變化或者部分抗原決定簇變化,仍可以識別抗原,因此有更大的適應(yīng)性。多克隆抗體制備的常見問題解析:1、免疫動物該如何選擇?選擇宿主動物時,一般要考慮兩個問題:(1)免疫效果能否保證。特別是對于蛋白抗原的情況,為了保證免疫成功,就要求宿主動物與抗原來源物種之間有較遠的親緣關(guān)...
雙特異性抗體(bispecificantibody,BsAb),擁有兩個不同的抗原結(jié)合位點,從而同時與兩個靶抗原結(jié)合,在發(fā)揮抗體靶向性的同時,介導(dǎo)另外一種特殊的功能,例如一個結(jié)合靶細胞上的特異抗原,另一個結(jié)合淋巴細胞或者吞噬細胞等效應(yīng)細胞,從而在腫瘤診斷及治療過程中發(fā)揮傳統(tǒng)抗體**的優(yōu)勢。作為最新應(yīng)用的BispecificTCellEngager(BiTE)與傳統(tǒng)抗體相比在組織滲透率、殺傷腫瘤細胞效率、脫靶率和臨床適應(yīng)癥等指標方面具有較強的競爭力,臨床應(yīng)用優(yōu)勢顯著。特別在使用...
DetroitR&D,Inc.成立于1997年,由HyesookKim博士創(chuàng)立,致力于通過jianduan技術(shù)提供最高質(zhì)量的產(chǎn)品,與研究界建立信任關(guān)系。底特律研發(fā)一直穩(wěn)步建立自己作為一個世界范圍內(nèi)的新型診斷和藥物篩選產(chǎn)品的來源。DetroitR&D研發(fā)實驗室和辦公室位于密歇根州底特律市一個新的再開發(fā)區(qū)的中心。DetroitR&D研發(fā)公司的原始項目旨在開發(fā)簡單廉價的高血壓試劑盒,用于測量血液,尿液和組織中的新型脂肪酸生物標志物,現(xiàn)已發(fā)展成為一家在高血壓,中風,心血管疾病和糖尿病...
1)對于非重要的細胞,如培養(yǎng)中的細胞、WCB的細胞等,將培養(yǎng)物與用過的培養(yǎng)基滅活后丟棄即可。對于較為重要的細胞,如來源珍貴或?qū)嶒炇抑屑毎2亓枯^小等可以采用以下(2)-(8)的方法。2)動物體內(nèi)接種除菌法:把受支原體污染的腫瘤細胞接種在同種動物皮下或腹腔中,借動物免疫系統(tǒng)消滅支原體,而腫瘤細胞卻能在體內(nèi)繼續(xù)生長,待一定時間后,從體內(nèi)取出細胞再進行培養(yǎng)繁殖。3)用清洗純化法清除支原體污染的方法:細胞營養(yǎng)馴化→優(yōu)質(zhì)細胞群的篩選→細胞清洗→反復(fù)離心洗滌,其原理是利用離心力、細胞、微...
雜交瘤技術(shù)的基本原理是通過融合兩種細胞而同時保持兩者的主要特征。這兩種細胞分別是經(jīng)抗原免疫的免疫動物脾細胞(如小鼠B淋巴細胞)和具有永生功能的腫瘤細胞(如小鼠骨髓瘤細胞)。被特異性抗原免疫的免疫動物脾細胞(B淋巴細胞)的主要特征是它的抗體能夠分泌產(chǎn)生結(jié)合抗原特定位置(表位)的抗體,但其自身不能在體外連續(xù)培養(yǎng),具有永生功能的腫瘤細胞(骨髓瘤細胞)則可在培養(yǎng)條件下無限分裂、增殖,即具有所謂永生性。在選擇培養(yǎng)基的作用下,只有由一個B淋巴細胞與一個骨髓瘤細胞融合的雜交瘤細胞才能具有持...
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